赤魟尾刺亲环素A基因的克隆、表达及生物活性专利查询专利号|摘要-满商公司网

赤魟尾刺亲环素A基因的克隆、表达及生物活性

基本信息

申请号	CN01136940.X	申请日	-
公开（公告）号	CN100509837C	公开（公告）日	2009-07-08
申请公布号	CN100509837C	申请公布日	2009-07-08
分类号	C07H21/04(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N15/64(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12Q1/18(2006.01)I;C12Q1/10(2006.01)I	分类	有机化学〔2〕;
发明人	徐安龙;涂洪斌;熊茜	申请（专利权）人	北京博奥环宇生物技术有限公司
代理机构	北京纪凯知识产权代理有限公司	代理人	龙淳
地址	100012北京市朝阳区亚运村惠忠北里312号天创世缘B2座1903室
法律状态	-

摘要

本发明通过构建赤魟(Dasytis akajei)尾刺cDNA文库和DNA测序，并根据所获得的亲环素(CyP)EST 3’端和载体核苷酸序列，设计引物，用PCR的方法，首次从赤魟尾刺cDNA文库中筛选克隆到亲环素A全长基因。新基因长度为656bp，编码167个氨基酸的成熟肽，所表达的蛋白质等电点为8.34，分子量约为18,021道尔顿。将赤魟尾刺亲环素A基因克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pTRX的trxA基因3’末端，构建符合读码框的融合基因，该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内可溶的形式存在，表达量可达60mg/L。通过Ni-Chelating亲和色谱层析，蛋白酶3C切割和凝胶过滤，得到纯度在95％以上成熟的重组赤魟亲环素A蛋白，得率为10mg/L。该蛋白具有肽基脯氨酸顺反异构酶活性。