一种悬浮细胞KBM5高效基因编辑稳定细胞系的建立方法
基本信息
| 申请号 | CN201910614553.9 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN110272875A | 公开（公告）日 | 2019-09-24 |
| 申请公布号 | CN110272875A | 申请公布日 | 2019-09-24 |
| 分类号 | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/90 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 黄黎珍;邹淑香;汪凯婷;邹芬;陈莹莹;谢水林 | 申请（专利权）人 | 广州华腾生物医药科技有限公司 |
| 代理机构 | 北京科家知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 广州华腾生物医药科技有限公司 |
| 地址 | 510000 广东省广州市黄埔区广州国际生物岛螺旋四路1号办公区第二层214-46单元 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种悬浮细胞KBM5高效基因编辑稳定细胞系的建立方法，包括以下步骤：(1)构建含靶向KBM5细胞基因的sgRNA的重组表达载体；(2)培养悬浮细胞KBM5；(3)采用电穿孔瞬时转染法将步骤(1)获得的重组表达载体和phCas9质粒共转染步骤(2)获得的KBM5细胞；(4)筛选阳性细胞；(5)筛选单克隆细胞；(6)对单克隆细胞进行鉴定；(7)阳性单克隆细胞扩大培养及冻存。本发明方法通过优化的电转染方案，可使转染效率高于50％，能有效解决悬浮细胞的脂质体转染效率低、病毒转染有致突变性等问题，且具有操作简便、成本低和基因敲除稳定系的效率高等优点。 |
