一种2‑酮基葡萄糖酸激酶的优化基因、表达载体及应用专利查询专利号|摘要-满商公司网

一种2‑酮基葡萄糖酸激酶的优化基因、表达载体及应用

基本信息

申请号	CN201710979079.0	申请日	-
公开（公告）号	CN107488671A	公开（公告）日	2017-12-19
申请公布号	CN107488671A	申请公布日	2017-12-19
分类号	C12N15/54(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12N9/12(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	孙文敬;何小用;周强;崔凤杰;余泗莲;钱静亚	申请（专利权）人	江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
代理机构	北京高沃律师事务所	代理人	江苏大学
地址	212000 江苏省镇江市学府路301号
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种2‑酮基葡萄糖酸激酶的优化基因、表达载体及应用，属于生物工程技术领域。本发明2‑酮基葡萄糖酸激酶的优化基因如SEQ ID NO.3所示。以穿梭表达质粒pPICZαB为载体，采用酶切和无缝克隆技术对其进行无分泌表达功能的定向化改造，并将经密码子偏向性优化的2‑酮基葡萄糖酸激酶基因(kguK)插入到载体启动子AOX1的下游。以毕赤酵母(Pichia pastoris)X‑33为宿主菌，通过电转化和博来霉素抗性平板筛选获取具有高拷贝kguK基因且稳定表达具有生物活性的KguK的重组菌株P.pastoris X/pPICZ(Δα)B‑kguK。经细胞破碎、亲和层析、透析和超滤浓缩等步骤，可以获得比活力达700U/g以上的KguK。