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一种检测绝对端粒长度的PCR方法

基本信息

申请号	CN201910312065.2	申请日	-
公开（公告）号	CN109943626A	公开（公告）日	2019-06-28
申请公布号	CN109943626A	申请公布日	2019-06-28
分类号	C12Q1/6851	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	白玉杰;林思妮;孙海星;张艳;张晓娟;王建辉;董红宇;吴东颖	申请（专利权）人	山东荆卫生物科技有限公司
代理机构	-	代理人	-
地址	261000 山东省潍坊市峡山区怡峡街197号生命科学园D栋
法律状态	-

摘要

本发明提供了一种检测绝对端粒长度（absolute telomere length）的PCR方法，能方便准确地检测人端粒的绝对长度，属于分子生物技术和医学检测领域。本发明采用基因合成的方法，分别合成端粒和单拷贝基因36B4的寡核苷酸序列，并连接到质粒载体上构建标准品，使用大肠杆菌体外扩增质粒标准品，提取质粒DNA，测量浓度，计算拷贝数及端粒总长度。确定标准品起始量，进行梯度稀释，采用荧光定量PCR法（Q‑PCR法）分别得到端粒及36B4的标准曲线，通过标准曲线对待测样本DNA的端粒总长度以及36B4的拷贝数绝对定量，从而计算待测样本DNA的平均绝对端粒长度。采用绝对端粒长度PCR法检测端粒长度，具有成本低、周期短、准确度高的优点，适合高通量检测，易于临床推广使用，实用性较强。