一种应用于黑水虻的CRISPR/Cas9基因编辑系统的标记基因
基本信息
| 申请号 | CN201910534976.X | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN112111526A | 公开（公告）日 | 2020-12-22 |
| 申请公布号 | CN112111526A | 申请公布日 | 2020-12-22 |
| 分类号 | C12N15/90;C12N9/22;C12N15/89;C12N15/113;C12N15/11;A01K67/027 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 黄勇平;詹帅;王四宝;寇宗庆;许军 | 申请（专利权）人 | 江苏绿博低碳科技股份有限公司 |
| 代理机构 | 上海恒慧知识产权代理事务所（特殊普通合伙） | 代理人 | 陈传喜 |
| 地址 | 200032 上海市徐汇区枫林路300号4号楼 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种筛选CRISPR/Cas9基因编辑黑水虻的方法，其包括以下步骤：（1）将white基因敲除的模板引物sgRNA1‑F和sgRNA2‑F分别和通用的反向引物进行PCR，将PCR产物回收纯化，即得模板sgRNA；（2）将所述的sgRNA模板进行体外大量扩增，获得单链状态的sgRNA；（3）将所述的单链状态的sgRNA和cas9蛋白混合，显微注射入黑水虻新产受精卵中；（4）将所述注射后的卵黑暗处理，直到孵化，观察孵化出的黑水虻的眼色表型，挑出眼睛白化个体。本发明用基因编辑技术实现了眼色相关基因的成功敲除，获得的基因突变黑水虻可以通过观察是否出现白化眼睛来判断，表型早期易观察，作为标记基因具有优良效果，可以为后续黑水虻基因功能研究提供便捷。 |
