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一种菰cDNA文库的构建方法

基本信息

申请号	CN201611239068.0	申请日	-
公开（公告）号	CN106636069A	公开（公告）日	2017-05-10
申请公布号	CN106636069A	申请公布日	2017-05-10
分类号	C12N15/10(2006.01)I;C40B40/08(2006.01)I;C40B50/06(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	臧剑;彭琼	申请（专利权）人	广东菰稻农业有限公司
代理机构	北京路浩知识产权代理有限公司	代理人	王文君
地址	410125 湖南省长沙市芙蓉区远大二路892号省农科院实验大楼
法律状态	-

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体公开了一种菰cDNA文库的构建方法。本发明提供了一种菰cDNA文库的构建方法，以菰的幼嫩叶片作为试验材料，由RNA提取，cDNA第一链合成，LD PCR，蛋白酶K消化，cDNA文库均一化，两次PCR放大，扩增产物纯化，Sfi I消化，酶切cDNA纯化，cDNA与PUC19载体连接，质粒的转化，以及克隆鉴定等12个步骤完成；该方法构建文库便捷，文库容量大，重组率高，完整性好，均一化后高丰度基因明显降低，为功能基因的验证奠定了基础。本发明构建的菰cDNA文库库容量大，达到了3.6×10⁶pfu·mL^‑1，插入片段平均长度为1000bp，重组率为97.9％，均一化全长cDNA文库能有效富集低丰度表达基因，降低冗余率。该文库适用于目的基因的筛选，以及后续的基因、蛋白互作分析。