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CRISPR/Cas9双靶点靶向敲除目的基因载体构建方法

基本信息

申请号 CN202010323098.X 申请日 -
公开（公告）号 CN111471712A 公开（公告）日 2020-07-31
申请公布号 CN111471712A 申请公布日 2020-07-31
分类号 C12N15/85(2006.01)I 分类 -
发明人 张梦娇;袁奕;唐林香;李昂;何胜祥 申请（专利权）人 江苏同科医药科技有限公司
代理机构 上海精晟知识产权代理有限公司 代理人 江苏同科医药科技有限公司
地址 215000江苏省苏州市苏州工业园区星湖街218号生物纳米园A4楼405室
法律状态 -

摘要

摘要 CRISPR/Cas9双靶点靶向敲除目的基因载体构建方法，包括以下步骤：通过以pLenti CRISPR‑E载体为基础，通过在线设计工具选择得分较高的靶位点设计引物，通过退火产生双链DNA，再经过连接转化将其构建到pLenti CRISPR‑E载体上，将载体转入受体细胞后，提取细胞DNA测序验证挑选出敲除效率较高的两个靶位点。本发明以pLenti CRISPR‑E载体为骨架，利用同源重组酶的原理，快速构建针对目标基因的双靶点CRISPR表达载体模型，本发明设计的双靶点CRISPR载体系统，可以应用于改造CRISPR单靶点的载体，从而提高打靶效率，实现多基因敲除，有很好的实用价值。