一种马鹿胰岛素样生长因子表达纯化工艺
基本信息
| 申请号 | CN201610325340.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN105821070A | 公开（公告）日 | 2016-08-03 |
| 申请公布号 | CN105821070A | 申请公布日 | 2016-08-03 |
| 分类号 | C12N15/70(2006.01)I;C07K14/65(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 党平;杜雨威;王瑜;宋平 | 申请（专利权）人 | 红冠庄（上海）生物医药科技有限公司 |
| 代理机构 | 上海兆丰知识产权代理事务所（有限合伙） | 代理人 | 上海蓝庄生物医药科技有限公司 |
| 地址 | 201799 上海市青浦区华浦路500号6幢A区1层140室 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种马鹿胰岛素样生长因子表达纯化工艺，包括下列步骤：用deer?IGF?Ⅰ基因片段和PET32a质粒构建重组质粒；对重组质粒进行扩增，筛选出单克隆阳性的重组质粒；将单克隆阳性的重组质粒转化入BL21(DEa)大肠杆菌中得到重组子，在培养基中通过重组子进行deer?IGF?Ⅰ蛋白诱导表达；将重组子的菌体从培养基中分离，并在破菌缓冲液中，进行破菌，使deer?IGF?Ⅰ蛋白以包涵体的表达形式进入破菌缓冲液，并将包涵体与破菌缓冲液分离；用变性剂使包涵体变性为可溶性融合蛋白溶解在变性剂中，将变性剂逐滴加入蛋白复性液，对变性剂中的可溶性融合蛋白进行复性；再对复性后的可溶性融合蛋白进行纯化和酶切，得到deer?IGF?Ⅰ蛋白；对deer?IGF?Ⅰ蛋白进行纯化、透析除盐和浓缩。 |
