一种大规模提取用于转染哺乳动物细胞的无内毒素质粒的方法专利查询专利号|摘要-满商公司网

一种大规模提取用于转染哺乳动物细胞的无内毒素质粒的方法

基本信息

申请号	CN201910860233.1	申请日	-
公开（公告）号	CN112481252A	公开（公告）日	2021-03-12
申请公布号	CN112481252A	申请公布日	2021-03-12
分类号	C12N15/10(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	肖水冰;秦伏波;鲁亮;万定一	申请（专利权）人	普健生物（武汉）科技有限公司
代理机构	南京纵横知识产权代理有限公司	代理人	徐瑛
地址	430200湖北省武汉市武汉东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋
法律状态	-

摘要

本发明公开一种大规模提取用于转染哺乳动物细胞的无内毒素质粒的方法，包括常规碱裂解法获得质粒粗提取液，然后将上清液加入层析柱中并依次加入Tris‑HCl和500～1000mmol/L NaCl混合液，Tris‑HCl和1200mmol/L NaCl混合液得到无内毒素的质粒洗脱液，再用异丙醇沉淀质粒并用TE缓冲液溶解得到目的质粒。本发明的有益效果是：(1)利用质粒和内毒素的带电荷量不同，用不同浓度的NaCl进行洗脱以除去内毒素，效果优异，避免内毒素去除试剂残留对转染细胞的影响；(2)使用常规试剂和仪器进行质粒提取，提取过程安全快速、节约成本、生产效率高，可大规模制备；(3)提取得到的质粒纯度高、超螺旋。