一种表达shRNA的AAV辅助包装载体、构建筛选方法和应用
基本信息
| 申请号 | CN201910443566.4 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN110184297A | 公开（公告）日 | 2019-08-30 |
| 申请公布号 | CN110184297A | 申请公布日 | 2019-08-30 |
| 分类号 | C12N15/861;C12N15/66;C12N7/00 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 李华鹏 | 申请（专利权）人 | 广州派真生物技术有限公司 |
| 代理机构 | 广州胜沃园专利代理有限公司 | 代理人 | 广州派真生物技术有限公司 |
| 地址 | 510000 广东省广州市高新技术产业开发区科学城揽月路3号广州国际企业孵化器G区304房 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种表达shRNA的AAV辅助包装载体及该载体的构建方法、筛选方法和应用；所述载体基于Rep2与CapDJ辅助包装载体，在CMV启动子驱动下的miR33‑5’UTR和miR33‑3’UTR之间插入克隆shRNA的位点2×BsmBI，shRNA表达小片段连接入所述骨架载体的2xBsmBI位点。所述载体的构建方法包括：制备克隆用骨架；制备shRNA表达小片段；将shRNA表达小片段连接至克隆用骨架载体上。所述筛选方法包括：用所述载体转化Stbl3感受态细菌，质粒提取；将提取的质粒共转染293T细胞；滴度比较筛选。本发明实现提高AAV生产效率约60％以上。 |
