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一种人源性抗核抗体的制备方法

基本信息

申请号	CN201010551055.3	申请日	-
公开（公告）号	CN102464717A	公开（公告）日	2012-05-23
申请公布号	CN102464717A	申请公布日	2012-05-23
分类号	C07K16/18(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I	分类	有机化学〔2〕;
发明人	姚科峰	申请（专利权）人	杭州博林生物技术有限公司
代理机构	浙江杭州金通专利事务所有限公司	代理人	杭州博林生物技术有限公司
地址	310018 浙江省杭州市杭州经济开发区6号大街452号1幢4A18-4A22室
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种人源性抗核抗体的制备方法，包括以下步骤：收集自身免疫病患者外周血单个核细胞，抽提总RNA，反转录获取cDNA文库；以获取的cDNA文库为模版，PCR法扩增轻链k、l基因及免疫球蛋白分子重链Fd基因；将轻链k、l基因克隆入pComb3Hss载体，构建轻链文库；将重链Fd基因载入载体，构建完成组合文库；将所得重组质粒转化大肠杆菌XL1-Blue，用辅助噬菌体M13KO7感染，随机的组合文库表达于丝状噬菌体表面，完成噬菌体表面展示；利用亲和层析柱纯化人源性抗核抗体Fab片段。本发明克服了随机组合抗体库随机性强、筛选工作量大及不容易获得特异性抗体的缺点，能从噬菌体抗体库中直接筛选出特异性抗体，方法简单易行，缩短了实验周期。