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重组人胰岛素前体的酶切转换方法

基本信息

申请号 CN202011607271.5 申请日 -
公开（公告）号 CN112625116A 公开（公告）日 2021-04-09
申请公布号 CN112625116A 申请公布日 2021-04-09
分类号 C07K14/62;C12P21/06 分类 有机化学〔2〕;
发明人 聂洪霞;刘海峰;黄菁;许波;吕晓林;张金迪;解福生;郝向慧 申请（专利权）人 华润昂德生物药业有限公司
代理机构 北京思元知识产权代理事务所（普通合伙） 代理人 余光军;霍雪梅
地址 252201 山东省聊城市东阿县阿胶街78号
法律状态 -

摘要

摘要 本发明公开了重组人胰岛素前体的酶切转换方法，包括：(1)将初步纯化的重组人胰岛素前体溶液加入缓冲液进行浓度和pH值的调整得到酶切反应底物混合液；(2)向酶切反应底物混合液中加入重组赖氨酰肽内切酶进行重组人胰岛素前体的酶切转换反应。本发明选择重组赖氨酰肽链内切酶作为工具酶，与常用的重组胰蛋白酶相比，单位前体蛋白所需的酶更少，酶切位点单一，酶切过程更高效，使人胰岛素前体的酶切转换效率达到95％以上；在放大酶切时，没有过酶切的顾虑且酶切后获得的目的蛋白纯度更高；重组赖氨酰肽链内切酶酶切最适pH范围离酶切前后蛋白的pI更远，有利于目的蛋白的稳定且对酶切环境中的盐浓度耐受范围更大。