基于CRISPR-Cas12a的胸膜肺炎放线杆菌快速可视化检测方法
基本信息
| 申请号 | CN202011643292.2 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN114686608A | 公开（公告）日 | 2022-07-01 |
| 申请公布号 | CN114686608A | 申请公布日 | 2022-07-01 |
| 分类号 | C12Q1/689（2018.01）I;C12Q1/6844（2018.01）I;C12Q1/04（2006.01）I;C12N15/11（2006.01）I;C12R1/01（2006.01）N | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 李刚;刘思国;王春来;张跃灵;张万江 | 申请（专利权）人 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） |
| 代理机构 | 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人 | - |
| 地址 | 150069黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平路678号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明涉及基于CRISPR‑Cas12a的胸膜肺炎放线杆菌快速可视化检测方法。具体涉及试剂盒，其包含一对针对apxIV的特异性引物对SEQ ID NO：14和15、16和17、18和19、20和21，或26和27（优选SEQ ID NO：26和27），以及针对上述引物扩增的产物的序列为SEQ ID NO：3、5、6或8（优选SEQ ID NO：8）的gRNA，其用于快速可视化检测胸膜肺炎放线杆菌。本发明基于RPA及CRISPR/Cas12a系统的检测方法，利用Cas12a蛋白，根据App的特异性基因apxIV设计特异性重组酶聚合酶扩增（RPA）引物及CRISPR/Cas12a系统探针，以实现RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立可用于检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法，并对RPA体系和CRISPR/Cas12a反应体系进行优化。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，可用于临床检测。 |
