一种利用isPLA高通量筛选单域抗体的方法及其应用
基本信息
| 申请号 | CN202110641192.4 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN113528569B | 公开（公告）日 | 2022-07-01 |
| 申请公布号 | CN113528569B | 申请公布日 | 2022-07-01 |
| 分类号 | C12N15/85（2006.01）I;C12N15/65（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12N15/62（2006.01）I;C12N15/13（2006.01）I;C07K16/18（2006.01）I;C40B30/04（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 马振毅;刘喆;殷曰苑;严飞;周瑞敏 | 申请（专利权）人 | 天津医科大学 |
| 代理机构 | 天津盛理知识产权代理有限公司 | 代理人 | - |
| 地址 | 300070天津市和平区气象台路22号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种利用isPLA高通量筛选单域抗体的方法，步骤如下：构建一个含21个随机氨基酸序列的CDR3区域的sdAb文库，序列的C端融合一个3×Flag标签；共转染细胞，固定细胞进行isPLA；随后分选、扩增、重组，经过多轮筛选和测序后，构建依次包含谷胱甘肽S‑转移酶GST、烟草花叶病毒TEV蛋白酶切位点，识别SQSTM1的sdAb序列、假单胞菌外毒素ETA的易位结构域和3×Flag标签的重组蛋白，在大肠杆菌中表达，随后经过纯化和酶切，即得。本方法能够从构建的高容量sdAb文库中筛选到特异性识别不同抗原决定簇的sdAbs，并且成本低、效率高。不涉及动物样本或杂交瘤的制备。 |
