一种提高基因编辑效率的方法

基本信息

申请号 CN201811318178.5 申请日 -
公开(公告)号 CN111154801A 公开(公告)日 2020-05-15
申请公布号 CN111154801A 申请公布日 2020-05-15
分类号 C12N15/85;C12N15/90 分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程;
发明人 靖超 申请(专利权)人 武汉纤然生物科技有限公司
代理机构 南京纵横知识产权代理有限公司 代理人 武汉纤然生物科技有限公司
地址 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业(九峰创新)基地B4栋三层C207-208
法律状态 -

摘要

摘要 本发明公开一种提高基因编辑效率的方法,包括以下步骤:(1)针对目的基因,构建上游TALEN质粒和下游TALEN质粒;(2)构建单链同源重组基因序列片段;(3)将上游TALEN质粒、下游TALEN质粒和单链同源重组基因序列片段以一定的比例转染目的细胞并筛选阳性单克隆。本发明选择低脱靶效应TALEN技术,将体外构建的同源重组基因序列制成单链DNA,使得限制性内切酶不能识别其序列而不能对其进行切割,从而延长其在体内的降解时间,提高该序列发生同源重组效率的几率,从而提高基因编辑效率;与此同时,同源重组基因序列经特定修饰后,获得的阳性单克隆增加。