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一种高效表达与制备外分泌型人源AFP的方法

基本信息

申请号 CN201410320779.5 申请日 -
公开（公告）号 CN104371017B 公开（公告）日 2018-03-16
申请公布号 CN104371017B 申请公布日 2018-03-16
分类号 C07K14/47;C12N15/81;C07K1/30 分类 有机化学〔2〕;
发明人 欧文斌;孟凡国;严子琴;刘丽;胡卫江;刘俊 申请（专利权）人 嘉兴博泰生物科技发展有限公司
代理机构 杭州九洲专利事务所有限公司 代理人 嘉兴博泰生物科技发展有限公司;浙江清华长三角研究院
地址 314006 浙江省嘉兴市南湖区亚太路705号创新大厦1109室
法律状态 -

摘要

摘要 一种高效表达与制备外分泌型人源AFP的方法，该方法主要包括如下三个方面的内容：(1)利用基因合成技术合成AFP的DNA序列，再采用基因克隆和分子生物学方法构建酵母重组表达质粒PpICZ α A‑AFP，并进行质粒抽提；(2)使用毕赤酵母表达系统体外诱导表达分泌型AFP重组蛋白，并通过优化表达时间、诱导剂添加量等条件得出最佳诱导条件；(3)优化硫酸铵分级沉淀,从发酵液上清中分离纯化得到分泌到胞外的AFP重组蛋白，在55％硫酸铵浓度下目的蛋白AFP几乎全部析出，且纯度高达98.844％；本发明将纯化得到的分泌重组蛋白AFP用临床检测电化学发光法检测其生物活性，其值达3500ng/mL。