一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽的方法
基本信息
| 申请号 | CN201910515446.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN110128552B | 公开（公告）日 | 2021-04-02 |
| 申请公布号 | CN110128552B | 申请公布日 | 2021-04-02 |
| 分类号 | C12N1/21(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N;C07K19/00(2006.01)I | 分类 | 有机化学〔2〕; |
| 发明人 | 潘尚书;汤传根;李宬;刘晓锐;崔怀言;陈松;张昊宁 | 申请（专利权）人 | 南京汉欣医药科技有限公司 |
| 代理机构 | - | 代理人 | - |
| 地址 | 210038江苏省南京市新港经济技术开发区兴和路5号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明属于多肽制备方法技术领域，特别涉及一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)的方法。其主要步骤包括构建重组利拉鲁肽中间体工程菌，通过培养和诱导大肠杆菌表达GLP‑1(7‑37)融合蛋白，再经过变性、复性、酶切和分离纯化得到中间体多肽GLP‑1(7‑37)。通过改变前导肽序列，表达方式变为胞内不溶性包涵体表达，表达量显著增加；洗涤后的包涵体采用高pH溶解，无需使用大量的变性剂，以蛋白浓度为5‑40g/L的高浓度加入包涵体溶解缓冲液，变复性时间不超过1h，溶解后可以立即进行肠激酶酶切；减少复性工序，缩小酶切体系，降低化学试剂成本，有利于工业化放大；采用离子交换分离纯化，分离度高。本发明制备的利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)达到92％以上，收率大于87％。 |
