用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用专利查询专利号|摘要-满商公司网

用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用

基本信息

申请号	CN201810865726.X	申请日	-
公开（公告）号	CN108977455B	公开（公告）日	2021-07-20
申请公布号	CN108977455B	申请公布日	2021-07-20
分类号	C12N15/70;C12N9/88;C12N1/21;A23L29/00;A61K38/51;A61P19/06;A61P13/12;C12R1/19	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴	申请（专利权）人	武汉康复得生物科技股份有限公司
代理机构	南京纵横知识产权代理有限公司	代理人	徐瑛;祝蓉蓉
地址	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药加速器3.1期4幢3层（1）厂房
法律状态	-

摘要

本发明公开了用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用。所述用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，包含：草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因和调控胞内锰离子浓度的基因。本发明将所述重组质粒导入大肠杆菌表达菌株和MntP基因缺失的大肠杆菌中，均得到可溶表达且有活性的草酸脱羧酶。并对重组菌株的培养温度和诱导温度进行了优化，发现培养温度为37℃，诱导温度为25℃时，草酸脱羧酶的表达量较高。通过有机溶剂沉淀和硫酸铵沉淀两步简单纯化，草酸脱羧酶比活力能达到45.6U/mg，纯度超过95％。本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单，草酸脱羧酶的表达量和比活力高，易于工业放大，成本低，有利于草酸脱羧酶的工业化生产和应用。