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一种分离提取糜蛋白酶的方法

基本信息

申请号	CN200810115987.6	申请日	-
公开（公告）号	CN101302505B	公开（公告）日	2010-12-08
申请公布号	CN101302505B	申请公布日	2010-12-08
分类号	C12N9/64(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	吕向广	申请（专利权）人	北京格源天润生物技术有限公司
代理机构	北京中创阳光知识产权代理有限责任公司	代理人	尹振启
地址	102609 北京市大兴区生物医药产业基地天府路3号
法律状态	-

摘要

本发明公开一种分离提取糜蛋白酶的方法，包括：将牛胰腺粉碎、过滤，提取滤液；对滤液去除杂蛋白，精制浓缩；加入硫酸铵并用氢氧化钠调pH值进行培养使糜蛋白酶原析出结晶；对上述培养物进行抽滤，提取出糜蛋白酶原，培养物抽滤液回收待用，加入胰蛋白酶使其酶解激活，经过滤后得第一半成品溶液；用CM-sopharoseFF凝胶介质装层析柱，用乙酸缓冲液进行平衡，平衡后用培养物抽滤液上样，用平衡液洗柱，洗至流出液OD 280值小于0.1，换用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液洗脱，收集洗脱峰，所得溶液即为第二半成品；合并第一半成品和第二半成品，脱盐浓缩，除菌过滤，冷冻真空干燥，即得糜蛋白酶成品。本发明解决了亲和层析介质昂贵，可重复使用次数少的缺点，适用于规模化大生产。