一种BCR免疫组库全长扩增的三代建库测序方法专利查询专利号|摘要-满商公司网

一种BCR免疫组库全长扩增的三代建库测序方法

基本信息

申请号	CN202010603495.2	申请日	-
公开（公告）号	CN111662970A	公开（公告）日	2020-09-15
申请公布号	CN111662970A	申请公布日	2020-09-15
分类号	C12Q1/6869(2018.01)I;C40B50/06(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	方涛	申请（专利权）人	武汉菲沙基因信息有限公司
代理机构	上海精晟知识产权代理有限公司	代理人	武汉菲沙基因信息有限公司
地址	430000湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种BCR免疫组库全长扩增的三代建库测序方法，步骤包括：1)根据BCR一致性序列的恒定区设计与合成引物；2)通过Oligo dT引物和BCR Template Switching Oligo引物的作用下合成第一链cDNA；3)BCR cDNA的全长第一轮和第二轮的扩增；4)BCR全长扩增子片段混样；5)文库构建；6)进行三代测序。本发明通过在BCR恒定区的保守区域设计多重引物，覆盖整个BCR的全长序列。在进行BCR序列扩增时，为进一步提高3’端扩增的有效性，设计了多组半巢式引物，通过半巢式引物的匹配筛选即可获得覆盖整个BCR全长的扩增子片段。通过PacBio建库流程，在扩增子的两端添加带有barcode的测序接头，即可进行PacBio测序，通过拆分与数据校正后获得准确率在99％以上的HiFi Reads。