一种巢式PCR数字定量方法
基本信息
| 申请号 | CN201410396994.3 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN104195236B | 公开（公告）日 | 2015-08-19 |
| 申请公布号 | CN104195236B | 申请公布日 | 2015-08-19 |
| 分类号 | C12Q1/68(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 谢兵 | 申请（专利权）人 | 乐普（北京）诊断技术股份有限公司 |
| 代理机构 | 北京金知睿知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 林俐;殷根娣 |
| 地址 | 102200 北京市昌平区科技园区超前路5号4栋生产楼3层 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明提供了一种巢式数字PCR定量方法，其特征是改进的巢式PCR及样本10倍稀释梯度分散至有限单元的数字PCR方法，包括下列步骤：在每个反应单元中预先加入矿物油,在矿物油下方加入1-5μL小体积的第一轮PCR混合液，所述混合液包括等体积的2×反应液和连续10倍稀释梯度的样本液，在第一退火温度下使用外侧引物进行第一轮扩增；随后在第一轮扩增产物中加入10-20倍于第一轮PCR体积的第二轮PCR反应液，在第二退火温度下使用内侧引物进行第二轮扩增；最后检测扩增产物，进行计数定量。本发明还提供了用于本发明的巢式数字PCR定量方法的基因检测试剂盒。 |
