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一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法

基本信息

申请号	CN201710065515.3	申请日	-
公开（公告）号	CN106755115A	公开（公告）日	2017-05-31
申请公布号	CN106755115A	申请公布日	2017-05-31
分类号	C12N15/89(2006.01)I;A01K67/027(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	徐洋	申请（专利权）人	广东圣赛生物科技有限公司
代理机构	北京东正专利代理事务所（普通合伙）	代理人	南方医科大学;广东圣赛生物科技有限公司
地址	510000 广东省广州市白云区沙太南路1023号-1063号
法律状态	-

摘要

本发明公开一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法，包括以下步骤：将针对大鼠DNA的Prkdc和IL2Rγ基因敲除的gRNA分别进行体外转录，再分别与体外转录的CAS9蛋白mRNA混合，冻存于无RNA酶的超纯水中，得到相应的注射液A及B；将人SIRPa基因组DNA扩增，纯化，冻存于无RNA酶的超纯水中，得注射液C；采用显微注射法将注射液A和B分别注射进不同的大鼠受精卵的胞质中，将注射液C注射进另一大鼠受精卵的原核中，将三种受精卵移植入不同假孕雌鼠体内，培育分别得到第二代大鼠A，B和C；将第二代大鼠A、B和C进行杂交，繁殖F1代；再将F1代进行杂交，得到敲除了IL2Rγ和Prkdc基因并转入了人SIRPa基因的免疫缺陷大鼠模型。该大鼠模型可以让人类细胞高效植入，符合试验指标，品系背景纯正。