一种重组载体CAR-CD244-antiCD19的制备方法专利查询专利号|摘要-满商公司网

一种重组载体CAR-CD244-antiCD19的制备方法

基本信息

申请号	CN201810984136.9	申请日	-
公开（公告）号	CN109097402B	公开（公告）日	2021-09-07
申请公布号	CN109097402B	申请公布日	2021-09-07
分类号	C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	顾雨春;尹乐	申请（专利权）人	北京呈诺医学科技有限公司
代理机构	北京卫平智业专利代理事务所（普通合伙）	代理人	谢建玲;郝亮
地址	101149 北京市大兴区经济技术开发区科创十三街18号院13号楼3层301
法律状态	-

摘要

本发明涉及一种重组载体CAR‑CD244‑antiCD19的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为CD19抗体的部分序列，为序列表序列2；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序；将连接正确的质粒，命名为：重组载体CAR‑CD244‑antiCD19。