一种性能改进的重组金黄色葡萄球菌蛋白A亲和配基及其构建方法
基本信息
| 申请号 | CN201310097553.9 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN103214563A | 公开（公告）日 | 2013-07-24 |
| 申请公布号 | CN103214563A | 申请公布日 | 2013-07-24 |
| 分类号 | C07K14/31(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12R1/445(2006.01)N | 分类 | 有机化学〔2〕; |
| 发明人 | 夏海锋;吴璞强;梁振东;王沙莉;郑梦杰 | 申请（专利权）人 | 嘉兴千纯生物科技有限公司 |
| 代理机构 | - | 代理人 | - |
| 地址 | 214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种性能改进的重组金黄色葡萄球菌蛋白A亲和配基及其构建方法。本发明利用分子生物学方法，选取天然蛋白A的B序列进行分子改造，在B序列的C端添加2个半胱氨酸，从而可以将蛋白A通过双位点偶联的层析基质，使连接更加稳定，在B序列第二个Loop后面添加了6个甘氨酸增加其长度，降低与抗体之间的结合力，从而使洗脱条件更加温和。在此基础上对蛋白A耐高浓度碱的性能进行改造，将B序列第23、30位的天冬酰胺和苯丙氨酸分别替换成苏氨酸和丙氨酸，得到耐碱性能更高的Z序列。然后，利用同尾酶将不同数量的Z序列首尾串联，并利用大肠杆菌的高效表达系统进行过量表达。将表达的重组蛋白A偶联到琼脂糖基质制备亲和层析填料，并用于纯化抗体，结果表明本发明制备的重组蛋白A亲和配基具有较好的洗脱性能和耐碱性能。 |
